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    科普園地 新聞中心

    細胞療法能替代器官移植嗎

    馮杰

    2018年09月06日 08:35

    撰文 羅貝托·格拉米諾力(Roberto Gramignoli) 翻譯 馮盈哲
    《光明日報》( 2018年09月05日 14版)


    通過移植肝細胞,由肝臟受損或肝功能不佳造成的疾病終于被攻破,這種治療方法能夠配合或取代器官移植。


    由于分離過程復雜,肝細胞無法長期存活,以及缺乏合適的肝臟捐獻者等原因,肝細胞療法只能在少數(shù)醫(yī)療中心實現(xiàn)。


    來自胎盤的羊膜上皮細胞或帶來一種全新的治療方法。這些細胞的特點在于,它們有著與成年人體內(nèi)其他各種細胞不同的能力,使得它們能夠克服其他治療方法無法克服的阻礙。


    Ⅰ·肝臟移植手術(shù)的偉大


    “真是一種美妙的感覺,我以前從未體驗過,也從未想過這一天會成真。”在接受肝臟細胞移植后的數(shù)日,一位病人對治療他的醫(yī)生說出了上述這番話。每天,病人們都用這樣的簡單話語給予我們鼓勵。通過這種移植手術(shù),我們?yōu)樵醋愿闻K的一種人體代謝疾病找到了治療方法。


    在實驗室,我們每天研究分子和細胞的工作機制,期望找到某種細胞療法,能夠治愈復雜且常常致命的疾病,是病人們自然流露出的快樂讓我們的工作更加有意義。


    在肝臟細胞移植領(lǐng)域,我們已經(jīng)研究了20多年。我們懂得了如何治療由病毒感染、過量用藥或代謝障礙引發(fā)的疾病,這其中就包括一種肝臟疾病。由于病人的肝臟細胞缺失一種酶,患者常常發(fā)育遲緩,或者伴有認知障礙,有時還會導致嚴重后果,甚至致命。


    通常來說,代謝類疾病治療起來非常困難,有時根本無法治療。代謝類疾病還具有遺傳性,所以代謝缺陷往往自出生第一天起就會表現(xiàn)出來。藥物和選擇性飲食可以在一定時期內(nèi)減緩或阻止病情惡化。然而數(shù)年過后,大多數(shù)代謝類疾病都會惡化,導致病人無法擁有正常的生活,即便是最簡單的生活。由于疾病的遺傳性,我們只能通過替換“有缺陷的”細胞,即替換掉那些無法正常行使生命功能的肝細胞來治療疾病。幾十年來,這種替換指的是手術(shù)切除患者肝臟,并移植一個能正常運作的肝臟。在今天,這種替換可以更加精確——向患者體內(nèi)注入來自捐獻者的正常肝細胞(肝臟中有大約1500億~2000億個細胞)。


    器官移植是一種復雜的外科手術(shù),它花了幾十年的時間才達到今天的卓越水平。如今,對大多數(shù)病例來說,恢復肝功能受損的唯一方法就是移植。2017年,正值首例肝臟移植手術(shù)成功的50周年之際,這一開創(chuàng)性療法的創(chuàng)造者——美國外科醫(yī)生托馬斯·斯塔茲爾去世了。20世紀60年代初,斯塔茲爾引入了肝臟移植方法,如今該療法的成功率(接受移植后病人的存活率)達到了將近70%~80%。


    首例肝臟移植手術(shù)成功之后的幾十年里,隨著越來越有效的方案解決了異體排斥問題。在外科領(lǐng)域,尤其是在藥理學層面,進步和改良不斷推進。然而,所用藥物的副作用或與其他藥物的相互作用,可能會導致嚴重的并發(fā)癥,甚至致殘,這個問題至今還未解決。再生醫(yī)學領(lǐng)域的最新進展為解決這個問題帶來了一絲希望。最近,在意識到正常細胞能夠在此類疾病上發(fā)揮潛在作用后,我們開始關(guān)注細胞療法,這種療法或?qū)磲t(yī)學的重大變革。


    Ⅱ·另一種移植的可能


    四十多年的研究表明,許多肝臟疾病可以通過肝細胞移植來治療。這時,病人的肝臟不需要整個摘除,而是向患者體內(nèi)移植成熟且正常的肝細胞來治療疾病。


    在今天,肝細胞移植還只是肝臟移植的一種輔助療法或備用方案。到目前為止,在等候器官移植或患有代謝疾病的病人當中,不到150人接受了肝細胞移植。肝細胞移植的一個好處是,它為等待肝臟移植的病人爭取了時間,并且增加了肝臟移植的匹配成功概率和存活概率。


    在移植到病人體內(nèi)后,肝細胞便能夠執(zhí)行肝臟的所有功能,阻止或逆轉(zhuǎn)導致疾病發(fā)生的病理過程,同時促進肝臟原本的再生能力。病人體內(nèi)的細胞也有助于肝臟的再生過程,但前提是它們得存活下來并避開阻止它們修復受損器官的病理過程。人類身體內(nèi)部先天的再生能力是一筆寶貴的財富,比如人類的肝臟每年都會全部更新。通過注入正常的肝細胞,現(xiàn)在我們能夠為肝臟提供必要的時間和功能,幫助它防御致命的傷害。


    有證據(jù)表明,細胞移植能夠有效減輕一些代謝疾病的嚴重癥狀,比如與膽紅素分子有關(guān)的代克里格勒-納賈綜合征(CNS),也可以阻止尿素在組織中聚集,后者的毒害作用常常引發(fā)無法補救的昏迷狀態(tài)。此外,我們還用細胞移植治療了由氨基酸代謝缺失導致的認知障礙或發(fā)育遲緩,比如常見的苯丙尿酮癥。


    盡管肝細胞移植已經(jīng)有20多年的歷史,但直到現(xiàn)在,仍只有少數(shù)幾個機構(gòu)能夠開展這種療法。最近幾年,只有5家歐洲機構(gòu)使用過肝細胞移植:英國倫敦國王學院醫(yī)院、比利時布魯塞爾的天主教魯汶大學、德國漢諾威醫(yī)學院、西班牙瓦倫西亞拉菲醫(yī)院和瑞典斯德哥爾摩卡羅琳斯卡醫(yī)學院。在歐洲之外,美國的匹茲堡兒童醫(yī)院也采用過這種療法。


    肝細胞供應數(shù)量有限,原因是分離肝細胞需要復雜、精確的操作程序,以及如何確保這些分離出來的細胞可以長期存活。在我們這里,用于移植的肝細胞必須嚴格滿足以下兩個條件:細胞必須是活著的細胞,也就是說細胞的生命力要足夠強大,能夠在復雜的分離過程中存活下來;細胞還必須是成熟的細胞,也就是能夠執(zhí)行肝臟的多種特殊功能,包括病人需要的功能。


    雖然這些要求看起來平淡無奇,但我們?nèi)赃M行了多年研究,才制備出適合移植的肝細胞。我們遇到的第一個困難,就是開發(fā)有效的技術(shù)和鑒定試劑,分離人類的肝細胞并用于臨床。我們必須在無菌條件下,將用于移植的細胞從肝臟上分離下來,把接受者面臨的風險降到最低。接著,肝細胞需要經(jīng)過嚴格的功能檢測。得益于幾十年的經(jīng)驗積累,我們的檢測技術(shù)已經(jīng)很完善。在進行肝細胞移植的醫(yī)院里(先前是美國的匹茲堡兒童醫(yī)院,現(xiàn)在是瑞典斯德哥爾摩的卡羅琳斯卡醫(yī)學院),通過這些檢測,有助于對接受者與捐獻者的細胞進行配對,以便更快速、高效地去除病灶。


    我們面臨的另一個困難是,如何將剛從捐獻者身上提取得到的肝細胞保存起來,直至移植到病人體內(nèi)??偟膩碚f,在其他細胞移植(例如骨髓細胞和臍帶血細胞)中,細胞可以冷凍保存數(shù)年,直到找到合適的接受者。不幸的是,這種保存方法并不適用于肝臟細胞。在今天的冷凍技術(shù)下,人類的肝細胞無法存活。經(jīng)過多年的實驗和功能性測試,人類肝細胞能夠在低溫(不低于零度)下保存2至4天。我們可以通過時間管理來解決這個問題:當捐贈者的肝臟能夠用于分離肝細胞時,負責準備提取細胞的小組和為接受者注入細胞的外科醫(yī)生一同行動,密切配合。


    這些細胞先是浸泡在一種溶液里,然后被注入循環(huán)系統(tǒng),直接到達肝臟組織。一旦進入肝臟組織內(nèi),移植的肝細胞便能與病人的肝臟結(jié)合,在很短的時間內(nèi)就能開始工作,執(zhí)行它們特有的功能,迅速改善病人的臨床條件。對于那些在24小時內(nèi)沒能成功與病人的肝臟組織結(jié)合的移植細胞,它們將被免疫系統(tǒng)清除,不會給病人造成任何危險。


    不難看出,與器官移植相比,人類肝細胞移植遠算不上入侵式的外科操作。在美國匹茲堡兒童醫(yī)院進行肝細胞移植手術(shù)時,外科醫(yī)生先找到門靜脈,即一條通向肝臟的靜脈血管,越過肚臍,接著在已經(jīng)萎縮的臍靜脈處插管,注入肝細胞。無論是在兒童身上,還是成人身上,這一過程能很快且無痛地將肝細胞移植到病人體內(nèi),不需要開刀,也不會留下可見的疤痕。


    Ⅲ·肝細胞拼圖的妙處


    我們必須回答的另一個問題是:要注入多少肝細胞,才能在安全的前提下改善病情?在大多數(shù)情況下,需要移植的肝細胞數(shù)量取決于病人的病情、年齡和體重。


    對于藥物服用過量或中毒(比如食用真菌)導致的急性肝炎,移植幾百萬個肝細胞就有可能挽救患者的生命。移植的肝細胞能夠幫助病人承受肝臟受到的損傷,并為肝臟的自主再生爭取時間,直至病人徹底康復。


    對于患有代謝疾病的病人,我們需要移植更多的肝細胞,相當于肝臟細胞總數(shù)量的5%~10%(約幾十億個細胞)。這些移植肝細胞進入病人肝臟后,就必須執(zhí)行原本缺失的肝臟功能,并在患者的有生之年一直如此。如果移植的肝細胞不能存活下來,病情就會復發(fā)。


    移植大量的肝細胞自然需要經(jīng)過許多程序。從不同的捐獻者身上提取肝細胞,并分多次注入接受者體內(nèi),這樣我們就能為病人移植50億~500億個肝細胞,執(zhí)行病人缺失的肝臟功能,達到治療的目的。舉例來說,最近我們在卡羅琳斯卡醫(yī)學院完成了一例肝細胞移植,分六次向一個青少年注入了60億個肝臟細胞,而移植的細胞來自兩位捐獻者。


    肝細胞移植面臨的最大的困難,永遠都是尋找可用于肝細胞分離的肝臟。在過去的二十年里,我們只能使用肝臟移植手術(shù)拒絕使用的肝臟。但是,被肝臟移植手術(shù)拒絕意味著肝臟細胞的質(zhì)量不怎么好。肝臟移植手術(shù)中移出的肝臟,在一定程度上解決了這個難題。這些肝臟缺少一種酶,但其他功能都正常。正是因為這一點,我們發(fā)現(xiàn)這些肝細胞有利用價值。事實證明,我們的判斷是正確的。


    2012年,我們的團隊從一位有酶缺陷的捐獻者身上分離出肝細胞,并把它們注入一位肝臟有另一種缺陷的病人體內(nèi),從而達到治療的目的。這種治療策略是安全的,因為盡管移植的肝臟缺少一種酶,但幾十億個移植細胞不足以在接受者身上產(chǎn)生與捐獻者相同的疾病。相反,移植細胞卻足以緩解病癥,因此移植是必要的。移植的肝細胞可以提供病人的肝臟不能行使的功能,同時病人的肝臟仍能行使移植的肝細胞缺少的功能——就像是一種“拼圖”的互相補償,從而不必移植整個器官。正是用這種方法,我們成功地治療了一個病人的苯丙尿酮癥。


    到目前為止,有兩名苯丙尿酮癥患者接受了肝細胞移植。幾個月前,我們展示了“拼圖”移植,而現(xiàn)在,我們和布魯塞爾的團隊將其變成了現(xiàn)實。另外,這種方法并不僅限于治療苯丙尿酮癥。無論如何,我們的工作不會止步于此。因為在過去幾年中,我們也仔細考察了干細胞的應用潛力。


    Ⅳ·干細胞療法的借用


    干細胞是一類能夠分化為不同成熟細胞的細胞。然而,干細胞常常分化不完全,導致分化后的細胞具有不同程度的功能,有些甚至還會功能不全。為了治療代謝類疾病,不僅需要找出最有活力的干細胞,還要保證它能分化為成熟、完整的肝臟細胞。但是,從20世紀60年代發(fā)現(xiàn)干細胞以來,沒有任何一種干細胞能通過嚴格的肝功能檢測。


    這時,我們在分離和制備移植肝細胞上的經(jīng)驗就派上用場了。我們的團隊在胎盤羊膜上皮細胞中找到了一種干細胞,其在治療肝臟疾病上有非常大的潛力。羊膜是一種袋狀膜,它包裹著胎兒,讓胎兒在9個月的妊娠期內(nèi)沉浸在羊水中,受到保護。


    特別的是,羊膜是一種沒有血管且結(jié)構(gòu)簡單的組織,堅韌而有彈性。羊膜的最里面是一層上皮細胞(AE細胞),與胎兒直接接觸。這些細胞在妊娠開始的頭幾天就形成了,那時嬰兒還只是一個很小的胚胎,一大團細胞還沒分裂成不同的組織。在生命形成的最初幾天,一些細胞離開胚胎形成了羊膜,而羊膜正是妊娠成功的必要條件。AE細胞整齊而結(jié)實,發(fā)揮著多種功能,包括生成羊水以及在9個月后“打破羊水”。更重要的是,AE細胞還能保護胎兒免受母體免疫系統(tǒng)的傷害。若沒有胎盤這一媒介,尤其是羊膜中的AE細胞,胎兒很可能會被母體的免疫系統(tǒng)認作為“外來物質(zhì)”——畢竟胎兒中有一半遺傳物質(zhì)來自父系(而另一半顯然來自母系)——因此會被母體排斥,早期自發(fā)性流產(chǎn)通常就是這種情況。


    AE細胞在很早就形成了,并且持續(xù)存在直至妊娠結(jié)束,這些特點讓它們顯得非常特別而寶貴。我們知道,妊娠剛開始時的細胞,會發(fā)育成胎兒并能分化為人體內(nèi)所有類型的細胞。AE就屬于妊娠最早期的細胞,因此保留著分化成為各種細胞的潛力。所以,很多研究人員和臨床醫(yī)生開始對胎盤感興趣,畢竟它們來源充足。


    在2017年,意大利就有46萬名新生兒呱呱墜地。在生產(chǎn)過程中,胎盤在嬰兒出生后排出,通常被作為廢棄組織丟棄。跟已經(jīng)使用多年的臍帶血一樣,使用胎盤沒有道德和宗教上的問題,這一點跟獲取胚胎干細胞不一樣。


    經(jīng)過十年的努力,我們的研究團隊證實了提取自人類胎盤的AE細胞的治療潛力。這項研究始于美國,但現(xiàn)在我們已經(jīng)把它帶到了歐洲,提供給當?shù)氐尼t(yī)學研究中心和醫(yī)院。在這十年里,我們掌握了如何提取AE細胞,并將其運用于臨床前研究,以評估它在治療肝臟疾病方面的安全性和效率。


    利用肝細胞移植的方法,將AE細胞注入病人體內(nèi)后,AE細胞在肝臟微環(huán)境的作用下,能夠成功分化為成熟、完整的肝細胞。直至今天,在治療各種肝臟疾病領(lǐng)域,AE細胞仍是效果最好、應用潛力最大的一種干細胞。


    零風險、無副作用(比如產(chǎn)生新疾病或腫瘤)的前景讓人振奮不已。我們已經(jīng)在患有肝病的動物模型身上移植了人類的AE細胞。由于在處理人類成熟肝細胞和肝細胞移植領(lǐng)域擁有豐富經(jīng)驗,我們設(shè)計了一項評估方法,用來評估AE細胞治療肝臟疾病的效果,而這些疾病在此前都可以用肝細胞移植來治療。


    實驗結(jié)果表明,這些干細胞為肝臟疾病的治療帶來了巨大幫助。AE細胞能提供短期支持,幫助恢復肝臟的自然再生能力,從而治療急性肝炎。但AE細胞能做的還不只這些。接下來,我們研究了AE細胞能否為代謝類疾病提供新的治療方法。楓糖尿癥(MSUD)和上文提到的更加普遍的苯丙尿酮癥,是最先被證實能用AE細胞治療,并取得令人滿意的治療效果的疾病。目前,我們已經(jīng)開始在研究其他遺傳性疾病能否用AE細胞治療。


    通過新生兒篩查,醫(yī)生能夠從一開始診斷出多種代謝類疾病,并及時進行治療,保證病人的生存。而第一種被認為有必要盡早診斷的疾病正是苯丙尿酮癥——它是一種常見的代謝類病,在美國的發(fā)病率很高(在意大利更高)。我們的研究一直受到了美國苯丙尿酮癥聯(lián)盟的支持(不只是在經(jīng)濟上),因為聯(lián)盟中的患者和他們的家庭在這種細胞療法中看到了希望。


    據(jù)估計,在意大利,每一萬名嬰兒中就有一名嬰兒患有苯丙尿酮癥。而現(xiàn)在,他們有望通過移植AE細胞獲得治療。在另一方面,盡管苯丙尿酮癥在不同的發(fā)育階段有著不同的發(fā)病率和嚴重程度,但病人通常不會被批準進行肝臟移植。這是因為,人們擔心必不可少的免疫抑制療法會對病人產(chǎn)生副作用,但病人又需要它來保護移植過來的組織和細胞。那么,對AE細胞來說,病人也必須接受免疫抑制療法嗎?


    Ⅴ·再生醫(yī)學療法的春天


    同器官移植一樣,移植細胞也需要從與接受者具有一定匹配度的捐獻者那里提取。因此,細胞療法(包括干細胞和肝細胞)一直都需要服用免疫抑制藥物,避免移植細胞的異體排斥現(xiàn)象。而AE細胞最讓人欣喜的地方在于,它們可能不受嚴格匹配的限制,也就是說,移植這類細胞,可能不需要必須使用“煩人的”免疫抑制方案。到目前為止,在所有移植了人類AE細胞的動物身上,我們從未使用免疫抑制方案,也沒有記錄到任何免疫排斥現(xiàn)象。鑒于人類和老鼠完全不同,無須使用免疫抑制方案讓人印象深刻。


    在卡羅琳斯卡醫(yī)學院,我們與其他意大利團隊合作,進行了更加深入的研究。在AE細胞身上,還有許多值得研究的地方,尤其是它們在母體和胎兒的免疫系統(tǒng)上的作用。近來,我們與科學界分享了AE細胞的一些全新而奇妙的分子策略,包括4種此前從未在任何細胞中觀察到的新策略。目前,我們正在利用這些機制,探索再生醫(yī)學療法,用于治療腫瘤。這些新療法將不僅可以用于肝臟,也可以用于人體的其他器官。


    近年來,越來越多的研究團隊開始對AE細胞的巨大潛力產(chǎn)生興趣。尋找器官移植的代替或補充療法,是再生醫(yī)學的首要任務之一。


    優(yōu)秀科研團隊之間的合作是開創(chuàng)新療法的強大引擎。正是由于和優(yōu)秀的意大利年輕科學家合作,比如卡利亞里大學的法比奧·馬隆朱和熱那亞IRCCS醫(yī)療中心的法比奧·莫蘭蒂,我們才取得了重要的研究成果。另外,與巴里大學、都靈大學和貝加莫馬里奧·內(nèi)格里藥理研究所的聯(lián)合研究,讓我們能夠一次次取得更大的成功。也許在不久的將來,我們就能把這些療法帶到臨床。


    由于臨床前研究的結(jié)果超出預期,我們打算盡快在卡羅琳斯卡醫(yī)學院進行首例AE細胞臨床移植。我們預計,最早在2018年下半年就能治療首批病人。我們已經(jīng)準備好生產(chǎn)用于臨床的AE細胞,并在等待授權(quán),建立首個AE細胞庫。這個AE細胞庫將類似于臍帶血庫和骨髓庫,為細胞療法提供額外或補充支持。另外,AE細胞還有一個重要的特點,即它們對目前的冷凍和解凍方案有很強的抵抗力。這一優(yōu)點使得這些細胞能夠隨時待命,及時被運往全球的任何一家移植中心。


    或許,首批能用上這種治療方法的疾病就是那些“孤兒病”,其他所有能夠通過肝細胞移植治療的代謝類疾病也將從中受益。


    由于在處理人類成熟肝細胞以及將其用于臨床移植上擁有豐富經(jīng)驗,我們希望能夠在最短的時間內(nèi),擴大能夠治療的疾病范圍。通過細胞移植、肝細胞移植和胎盤AE細胞移植,我們有望找到新的治療方法,用于治療目前無法醫(yī)治的肝臟疾病。不僅如此,AE細胞還有可能用于治療肺部、腎臟和神經(jīng)系統(tǒng)方面的疾病。在澳大利亞莫納什健康中心,他們已經(jīng)按照我們的方案進行臨床治療。我相信,很多其他機構(gòu)也會陸續(xù)跟進。對任何年齡段的病人,細胞療法都能為他們提供新的治療方法。更為重要的是,最新的研究成果表明,細胞療法或許可以用來治療腫瘤。但是,這方面的應用還在討論之中,并且我們還是處于臨床前試驗階段。在所有人的合作和支持下,我們希望在未來幾年,將細胞療法變成具體、可行的治療方法。


    (作者:羅貝托·格拉米諾力,系瑞典卡羅琳斯卡醫(yī)學院的助理教授,致力于研究治療代謝類疾病和急性肝炎的細胞療法。除肝細胞移植外,他還在推進創(chuàng)新型臨床前研究,旨在實現(xiàn)首例無須免疫抑制方案的胎盤干細胞移植。)


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    2018年09月06日 04:36
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